קביעת תכולת חומצה אוקסלית בפירות וירקות באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC)
1. עקרון ניסיוני ותכנון שיטה
כחומצה אורגנית נפוצה בפירות וירקות, תכולת חומצה אוקסלית משפיעה ישירות על הטעם והערך התזונתי של המזון. ניסוי זה משתמש בכרומטוגרפיית נוזלים בעלת ביצועים גבוהים בפאזה הפוכה (RP-HPLC). בתנאי פאזה ניידת חומצית, חומצה אוקסלית מופרדת באופן בסיסי מחומרים מפריעים באמצעות עמודה כרומטוגרפית C18. גלאי אולטרה סגול המוגדר על 210 ננומטר משמש לניתוח כמותי, המבוסס על מאפייני ספיגת ה-UV של קבוצות הקרבוקסיל במולקולות חומצה אוקסלית.
2. עקומת תקן והכנת דגימה
להכנת תמיסות סטנדרטיות נעשה שימוש בשיטת דילול גרדיאנט: יש לשקול במדויק 25.0 מ"ג של חומצה אוקסלית דיהידרט ולדלל ל-25 מ"ל עם מים אולטרה-טהורים לקבלת תמיסת בסיס של 1 מ"ג/מ"ל. תמיסת זו מדוללת ברצף לסדרה של תמיסות סטנדרטיות בריכוזים של 50, 100, 200, 400 ו-800 מיקרוגרם/מ"ל, כאשר כל ריכוז מוזרק בשלושה עותקים.
להכנת הדגימה, נעשה שימוש בשיטת מיצוי בסיוע מיקרוגל: שקלו 5.00 גרם של הומוגנאט פירות/ירקות, הוסיפו 10 מ"ל של תמיסת חומצה הידרוכלורית 0.1 מול/ליטר, טפלו במיקרוגל בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, סננו דרך פילטר ממברנה בקוטר 0.45 מיקרומטר ואספו את התסנין לבדיקה.
3. אופטימיזציה של תנאי כרומטוגרפיה
הפאזה הניידת היא מערכת בופר אשלגן דיהידרוגן פוספט (pH 2.5)-אצטוניטריל (95:5) בריכוז 0.01 מול/ליטר, עם קצב זרימה של 0.8 מ"ל/דקה וטמפרטורת עמודה של 35°C. התאמת יחס האצטוניטריל מראה שכאשר הפאזה האורגנית עולה על 10%, זמן השמירה של חומצה אוקסלית מתקצר לפחות מ-3 דקות, אך מתרחש שיא זנב. בתנאים הסופיים המותאמים אישית, זמן השמירה של חומצה אוקסלית הוא 4.2 דקות, מה שמשיג הפרדה מוחלטת מחומצת לימון וחומצה מאלית סמוכות (רזולוציה > 1.5).
4. אימות שיטה
אימות טווח ליניארי מראה קשר ליניארי טוב בין שטח השיא לריכוז בטווח של 10–1000 מיקרוגרם/מ"ל (R² = 0.9993). גבול הגילוי (LOD), שנקבע בשיטת יחס אות לרעש, הוא 0.5 מיקרוגרם/מ"ל. בבדיקות חזרתיות, ה-RSD עבור שש קביעות חוזרות של אותה דגימת תרד הוא 1.8%. ניסויי התאוששות ספייק בשלוש רמות (80%, 100% ו-120%) מניבים התאוששות ממוצעת של 98.2%, 102.4% ו-97.8%, בהתאמה, ועומדים בדרישות לניתוח כמותי.
5. ניתוח של דגימות אמיתיות
נבדקו שישה פירות וירקות הזמינים מסחרית: תרד (356 ± 12 מ"ג/100 גרם), סלרי (215 ± 9 מ"ג/100 גרם), עגבנייה (18 ± 2 מ"ג/100 גרם), תפוח (6 ± 1 מ"ג/100 גרם), בננה (לא זוהתה) וברוקולי (89 ± 5 מ"ג/100 גרם). השוואה לשיטת התקן הלאומית (GB 5009.277-2016) מראה כי הסטייה היחסית בין שתי השיטות קטנה מ-5%, דבר המאמת את אמינותה של שיטה זו. בפרט, שיטת HPLC מפגינה רגישות גבוהה יותר משיטות טיטרציה מסורתיות בעת ניתוח דגימות בעלות תכולה נמוכה.
6. הערות מפתח
יש לשלוט בקפדנות בערך ה-pH במהלך הטיפול המקדים בדגימה. אם ה-pH של התמצית עולה על 3, משקעי סידן אוקסלט יובילו לתוצאות בדיקה נמוכות. יש להכין את הפאזה הניידת טרייה מדי יום כדי למנוע משקעי מלחים וחסימת עמודה. לאחר כל 20 הזרקות, יש לשטוף את העמודה עם אצטוניטריל-מים (30:70) למשך 30 דקות כדי למנוע פגיעה ביעילות העמודה. עבור דגימות המכילות פיגמנט (למשל, כרוב סגול), מומלץ להוסיף שלב טיהור של מיצוי פאזה מוצקה לפני ההזרקה.
7. הוראות יישום והרחבה
ניתן להרחיב שיטה זו לגילוי חומצה אוקסלית בדגימות ביולוגיות כגון שתן ודם. על ידי התאמת הרכב הפאזה הניידת (למשל, הוספת טטרה-בוטיל-אמוניום הידרוקסיד), ניתן לקבוע בו זמנית חומצה אוקסלית ומטבוליטים שלה. בשילוב עם גלאי ספקטרומטריית מסות, ניתן לבסס שיטת גילוי עקבות מדויקת יותר. בתעשיית עיבוד המזון, שיטה זו יכולה לספק תמיכה חשובה בנתונים לבחירת זנים בעלי תכולת חומצה אוקסלית נמוכה ולאופטימיזציה של תהליכי בישול.
חברת Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – חומצה אוקסלית
חברת Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. היא ספקית ויצואנית אמינה של חומצה אוקסלית באיכות גבוהה (דרגה תעשייתית, 99.6% מינימום) משאנדונג, סין. חומצת האוקסלית שלנו היא מוצק גבישי לבן, המכונה גם חומצה אתאנדיואית, עם נוסחה מולקולרית C₂H₂O₄. היא מתאפיינת בטוהר גבוה, זיהומים נמוכים ואיכות יציבה בכל אצווה, ועומדת בדרישות של תעשיות הטקסטיל, העור, המתכת, עיבוד אדמה נדירה, ניקוי כימי ובנייה.
אנו מספקים חומצה אוקסלית נטולת מים ודיהידרטית, הזמינה בשקיות של 25 ק"ג, 50 ק"ג ושקיות בתפזורת של 1000 ק"ג. עם נהלי בקרת איכות קפדניים, דוחות בדיקה מלאים ותוכניות אספקה גמישות, אנו מבטיחים אספקה יציבה וביצועים עקביים עבור קונים גלובליים. המוצרים שלנו יוצאו באופן נרחב לדרום מזרח אסיה, אירופה, אפריקה ואמריקה, וזכו להכרה באיכות אמינה ובתמחור תחרותי.
בחרו ב-Zibo Anhao Chemical לאספקת חומצה אוקסלית אמינה ושירות כימי מקצועי ומהנה.
בחרו ב-Zibo Anhao Chemical לחומצה אוקסלית בעלת טהרה גבוהה המספקת ביצועים יציבים וערך לעסק שלכם. צרו קשר להזמנות בכמויות גדולות או מפרטים טכניים: info@anhaochemical.com
